При разделении аминокислот методом ионообменной хроматографии в качестве неподвижной фазы используются гранулы синтетического полимера, несущие сульфогруппы (-SO3-). Эти группы ионизированы во всем диапазоне pH и несут отрицательный заряд. Для подготовки к работе ионообменник помещают в колонку и промывают Na+-содержащим буферным раствором с pH 2. При этом сульфогруппа (красный цвет) связывает ионы натрия (синий цвет). Если теперь нанести на колонку раствор аминокислот (1а), то положительно заряженные аминокислоты (зелёный цвет) вытеснят ионы натрия и будут сорбированы на ионите. Поскольку аминокислоты не несут заряда в изоэлектрической точке, их элюируют с колонки буфером с более высоким значением pH (1б). В качестве примера приведён эксперимент (3) по разделению аспарагиновой кислоты, треонина и гистидина. Графики титрования (2) наглядно объясняют, почему три аминокислоты элюирутся в указанной последовательности.
Строго говоря, аминокислоты элюируются при величинах pH, значительно ниже изоэлектрических точек, поскольку за связывание с ионообменником конкурируют Na+-ионы буферного раствора.
Молекулярная биология Книга посвящена ряду актуальных проблем молекулярной биологии (молекулярный ...
Gene Control Gene Control offers an articulate, current description of how gene expression is controlled in eukaryotes, reviewing and summarizing the extensive ...
Горизонты биохимии Книга содержит ряд проблемных статей по различным вопросам молекулярной ...