Первую фазу трансляции — инициацию — можно разделить на несколько стадий. На первой стадии два белковых фактора инициации IF-1 и IF-3 связываются с 30S-cyбчастицей (1). Затем ещё один белковый фактор, IF-2, образует комплекс с ГТФ (GTP) (2), что облегчает ассоциацию 30S-cyбчacтицы с мРНК (mRNA) и связывание тРНК (tRNA), соответствующей инициирующему кодону (3). У прокариот стартовая тРНК несёт N-формилметионин (f-Met), у эукариот — метионин. В завершение SOS-субчастица связывается с вышеупомянутым комплексом (4). На третьей и четвёртой стадиях идёт освобождение факторов инициации и гидролиз связанного с IF-2 ГТФ до ГДФ (GDF) и неорганического фосфата Р1. Таким образом, связанный с 70S-рибосомой инициирующий комплекс содержит формилметионин-тРНК в тРНК-связывающем участке, называемом пептидильным участком (Р). Второе место связывания, акцепторный участок (А), во время этой фазы трансляции остаётся свободным.