Определение активности лактатдегидрогеназы [ЛДГ (LDH)] основано на том факте, что восстановленный кофермент НАДН+ H+ поглощает свет при 340 нм, в то время как у НАД+ (NAD+) при этой длине волны поглощение отсутствует. Спектры поглощения (то есть графики зависимости А от длины волны) субстрата и кофермента в ЛДГ-реакции показаны на рис. Б, 1.
Различия в поглощении НАД+ и НАДН между 300 и 400 нм обусловлены изменениями никотинамидного кольца при окислении или восстановлении (см. Лактатдегидрогеназа: структура). Для определения активности в кювету помещают прежде всего растворы лактата и НАД+ и регистрируют поглощение при постоянной длине волны 340 нм. Некаталитическая реакция протекает с очень низкой скоростью. Поэтому измеряемые количества НАДН образуются только после добавления ЛДГ. Так как скорость увеличения поглощения ΔA/Δt по закону Ламберта-Бера пропорциональна скорости реакции Δc/Δt, активность ЛДГ можно рассчитать с помощью коэффициента экстинкции ε при 340 нм или путём сравнения со стандартным раствором.
Различия в поглощении НАД+ и НАДН между 300 и 400 нм обусловлены изменениями никотинамидного кольца при окислении или восстановлении (см. Лактатдегидрогеназа: структура). Для определения активности в кювету помещают прежде всего растворы лактата и НАД+ и регистрируют поглощение при постоянной длине волны 340 нм. Некаталитическая реакция протекает с очень низкой скоростью. Поэтому измеряемые количества НАДН образуются только после добавления ЛДГ. Так как скорость увеличения поглощения ΔA/Δt по закону Ламберта-Бера пропорциональна скорости реакции Δc/Δt, активность ЛДГ можно рассчитать с помощью коэффициента экстинкции ε при 340 нм или путём сравнения со стандартным раствором.
Статьи раздела «Ферментативный анализ»:
- Ферментативный анализ
- А. Основы спектрофотометрии
- Б. Определение активности лактатдегидрогеназы
- В. Ферментативное определение глюкозы
Структура:
Списки:
Сложность материала:
Величины и единицы:
Книги Список книг
Gene Control Gene Control offers an articulate, current description of how gene expression is controlled in eukaryotes, reviewing and summarizing the extensive ...
Microarray Image Analysis: An Algorithmic Approach (Chapman & Hall/CRC Computer Science & Data Analysis) To harness the high-throughput potential of DNA microarray technology, it is crucial that the analysis stages of the process are decoupled from the ...
Стероиды. Строение, получение, свойства и биологическое значение, применение в медицине и ветеринарии Учебное пособие освещает систематизированную совокупность современных знаний ...
Лекции по природоведческой микробиологии Книга основана на курсе лекций, прочитанных в МГУ им. М. В. Ломоносова в 1995-2002 гг. ...